УДК 616.74-009.17:612.014.464

 О.В. ЛАПШИНА^1,2, Е.А. АНТИПЕНКО², К.Н. КОНТОРЩИКОВА², А.В. БАРАНОВА³, Д.В. СЕДЫШЕВ¹, А.В. ГУСТОВ²

¹Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А. Семашко, 603126, г. Нижний Новгород, ул. Родионова, д. 190

²Нижегородская государственная медицинская академия, 603005, г. Нижний Новгород, пл. Минина, д. 10/1

³Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, 603022, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, д. 23 

Лапшина Ольга Валерьевна ― врач-невролог 1 неврологического отделения, заочный аспирант кафедры неврологии, психиатрии и наркологии, тел. +7-908-232-11-31, e-mail: olga-med@list.ru

Антипенко Елена Альбертовна ― доктор медицинских наук, доцент кафедры неврологии, психиатрии и наркологии, тел. +7-951-919-41-96, e-mail: antipenkoea@gmail.com

Седышев Дмитрий Вадимович ― кандидат медицинских наук, заведующий 1 неврологическим отделением, тел. +7-910-141-39-51, e-mail: Doc_neuro@mail.ru

Густов Александр Васильевич ― доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой неврологии, психиатрии и наркологии, тел. +7-910-873-93-57, e-mail: gustovava@mail.ru

Конторщикова Клавдия Николаевна ― доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой клинической лабораторной диагностики, тел. +7-903-055-71-99, e-mail: kontclin@mail.ru

Баранова Алина Владимировна ― студентка 4 курса Института биологии и биомедицины, тел. +7-960-180-16-73, e-mail: divitty@yandex.ru

 Активация свободнорадикального окисления, как типового патологического процесса, является важным звеном патогенеза ряда аутоиммунных заболеваний, в том числе миастении гравис. В работе представлено исследование окислительного гомеостаза у 20 пациентов с миастений. Продемонстрировано изменение окислительного гомеостаза у пациентов с миастенией по сравнению со здоровыми добровольцами. Проанализирована динамика показателей окислительных процессов и антиоксидантной активности при включении в терапевтический комплекс озонотерапии. Обнаружено положительное влияние озонотерапии на процессы свободно-радикального окисления, что позволяет считать озонотерапию патогенетически обоснованным методом лечения миастении.

Ключевые слова: миастения гравис, озонотерапия, перекисное окисление липидов.

 

O.V. LAPSHINA^1,2, E.A. ANTIPENKO², K.N. KONTORSHCHIKOVA², A.V. BARANOVA³, D.V. SEDYSHEV¹, A.V. GUSTOV²

¹Nizhny Novgorod Regional Clinical hospital named after N.A. Semashko, 190 Rodionov Str., Nizhniy Novgorod, Russian Federation, 603126

²Nizhny Novgorod State Medical Academy, 10/1 Minin Square, Nizhny Novgorod, Russian Federation, 603005

³National Research Nizhny Novgorod State University named after N.I. Lobachevsky, 23 Gagarin Pr., Nizhny Novgorod, Russian Federation, 603022

The influence of ozone therapy on oxidative homeostasis in patients with myasthenia

Lapshina O.V. ― doctor-neurologist of the 1^st Neurology Department, correspondence postgraduate student of the Department of Neurology, Psychiatry and Narcology, tel. +7-908-232-11-31, e-mail: olga-med@list.ru

Antipenko E.A. ― D. Med. Sc., Associate Professor of the Department of Neurology, Psychiatry and Narcology, tel. +7-951-919-41-96, e-mail: antipenkoea@gmail.com

Sedyshev D.V. ― Cand. Med. Sc., Head of the 1^st Neurology Department, tel. +7-910-141-39-51, e-mail: Doc_neuro@mail.ru

Gustov A.V. ― D. Med. Sc., Professor, Head of the Department of Neurology, Psychiatry and Narcology, tel. +7-910-873-93-57, e-mail: gustovava@mail.ru

Kontorshchikova K.N. ― D. Med. Sc., Professor, Head of the Department of Clinical Laboratory Diagnostics, tel. +7-903-055-71-99, e-mail: kontclin@mail.ru

Baranova A.V. ― 4^th-year student of the Institute of Biology and Biomedicine, tel. +7-960-180-16-73, e-mail: divitty@yandex.ru

Activation of free radical oxidation, as a typical pathological process, is an important link in the pathogenesis of several autoimmune diseases, including myasthenia gravis. In the study of oxidative homeostasis in 20 patients with myasthenia gravis, there were changes of oxidative homeostasis in patients with myasthenia as compared to healthy volunteers. The dynamics was analyzed of indicators of oxidation processes and antioxidant activity included into the therapeutic complex of ozone therapy. There was a positive influence of ozone therapy on the processes of free radical oxidation, which makes ozone therapy pathogenetically substantiated method of treatment of myasthenia gravis.

Key words: myasthenia gravis, ozone therapy, lipid peroxidation.

 

Миастения ― хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся нарушением нервно-мышечной передачи вследствие образования аутоантител к различным аутоантигенным эпитопам периферического нейромышечного аппарата, клинически проявляющееся слабостью и патологической мышечной утомляемостью [1, 2]. Распространенность миастении колеблется от 4,8-20,0 на 100 000 человек. Тяжесть заболевания, приводящая к инвалидизации пациентов, и частота летальных исходов определяют высокую актуальность поиска наиболее эффективных методов лечения этой патологии.

Активация свободнорадикального окисления, как типового патологического процесса, является важным звеном патогенеза ряда аутоиммунных заболеваний, в том числе миастении гравис. Повышенное содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), обусловленное избытком аутоантител, а также нарушением процессов их элиминации, приводит к активации свободнорадикальных процессов и, в первую очередь, перекисного окисления липидов (ПОЛ), вследствие взаимодействия ЦИК с мембранным аппаратом клетки [3]. Активация ПОЛ в значительной степени усугубляет течение заболевания [4, 5].

Озонотерапия ― один из немедикаментозных методов лечения, использующийся в различных областях медицины: терапии, хирургии, акушерстве и гинекологии, дерматологии, косметологии, стоматологии, неврологии, гастроэнтерологии и других [6]. Озон обладает более выраженными окислительными свойствами по сравнению с кислородом, что обуславливает его взаимодействие с различными органическими и неорганическими соединениями. Несмотря на высокую реакционную способность, установлено селективное действие озона на органические молекулы, содержащие двойные связи: аминокислоты, пептиды, белки, нуклеиновые кислоты, полиненасыщенные жирные кислоты, входящие в состав билипидного слоя мембран клеток и липопротеидов плазмы крови. Селективность озона обусловлена особенностями строения молекулы, а именно наличием поляризованного атома кислорода, придающего всей молекуле электрофильный характер. В биологических системах преобладает взаимодействие озона с ненасыщенными жирными кислотами с образованием промежуточных продуктов ― озонидов (соединений с различным количеством атомов кислорода) [6-10].

 Цель исследования ― изучение показателей процессов свободнорадикального окисления у пациентов с миастенией и их динамика под влиянием озонотерапии.

 Материал и методы исследования

Проведено исследование процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови у 20 пациентов с миастенией. Среди пациентов было 6 мужчин, 14 женщин. Средний возраст составил 48,4 лет (от 29 до 77 лет). У всех пациентов имелась генерализованная форма миастении. Все пациенты получали стандартное лечение, включавшее пульс-терапию дексаметазоном, антихолинэстеразные препараты, препараты калия, калийсберегающие диуретики. Пациенты первой группы (10 человек) получали только стандартную терапию. Пациенты второй группы (10 человек) на фоне стандартной терапии получали внутривенные инфузии озонированного физиологического раствора в количестве 6 процедур через день в концентрации 2.2-2.4 мг/л. Рандомизация по группам проводилась случайным образом с использованием таблицы случайных чисел.

Первая и вторая группы были сопоставимы по возрасту, полу и клинической картине заболевания. Также была сформирована группа здоровых добровольцев (14 человек), сопоставимая с группами пациентов по возрастно-половым характеристикам. Анализировали показатели окислительных процессов с использованием метода индуцированной биохемолюминесценции (БХЛ) до начала лечения у больных миастенией в сравнении с показателями у здоровых добровольцев. Также оценивали динамику показателей пациентов с миастенией в первой и второй группах. Определение уровня продуктов ПОЛ (диеновых конъюгат, триеновых конъюгат, оснований Шиффа) проводили методом Волчегорского И.А. (1989). Для регистрации индуцированной биохемилюминесценции использовали аппарат биохемилюминометр (БХЛ-07), сопряженный с компьютером IBMPC/AT в диалоговом режиме. Анализировали следующие показатели: индекс I_max (мВ) ― максимальная интенсивность свечения, показывающая потенциальную способность биологического объекта к свободнорадикальному окислению, индекс S (мВ) ― светосумма хемилюминесценции за 30 секунд ― величина, соответствующая обрыву цепи свободнорадикального окисления, и поэтому обратно пропорциональная антиоксидантной активности сыворотки крови, tg(-2α) ― показатель антиоксидантной системы защиты, характеризующий скорость ее восстановления, индекс Z ― отношение индексов S/I_max, характеризующий уровень антиоксидантной защиты.

Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью пакета программ Statistica. При описании результатов исследования количественные данные представлены в виде М (±σ), где М ― среднее арифметическое, σ ― стандартной отклонение. Расчет доверительного интервала (ДИ) проводился откорректированным методом Вальда, уровень доверия 95%. Сравнение групп при двух измерениях на протяжении периода наблюдения проводилось с использованием критерия Вилкоксона.

Результаты и обсуждение

При исследовании окислительных процессов у пациентов с миастенией до лечения обнаруживалось значительное повышение показателей индуцированной БХЛ по сравнению с таковыми у здоровых добровольцев. Так, I_max была повышена в 7,1 раза, tg(-2α) ― в 7,9 раза, что указывало на повышение процессов свободнорадикального окисления у пациентов с миастенией. Показатели окислительных процессов у пациентов с миастенией и здоровых добровольцев представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Показатели окислительных процессов у больных миастенией и здоровых добровольцев

Показатели	Пациенты с миастенией	Здоровые добровольцы	Уровень достоверности различий р
Imax, мВ	386,8±62,3	54,4±2,5	р=0,023
S, мВ	1666,2±223,1	233,4±9,7	р=0,042
Z	4,7±0,3	4,5±0,2	р=0,028
tg(-2α)	184,5±32,2	23,3±1,5	р=0,032
ДК, отн. ед.	0,2632± 0,0029	0,2268± 0,0126	р=0,035
ТК, отн. ед.	0,2600± 0,0114	0,2383± 0,0274	р=0,041
ОШ, отн. ед.	58,2046± 5,6970	31,8513± 1,3673	р=0,025
ОШ/ (ДК+ТК)	108,7250± 8,7136	73,4842± 4,4201	р=0,022

Динамика показателей окислительных процессов при проведении стандартной терапии и в группе с использованием озонированного физиологического раствора представлена в таблице 2. Во второй группе (получавшей озонированный физиологический раствор) значения I_max, S, tg(-2α) после лечения значимо снижались, а значения Z увеличивались, что указывало на повышение антиоксидантной способности плазмы крови при включении в терапевтический комплекс озонированного физиологического раствора. Во второй группе отмечалось снижение активности свободнорадикальных процессов, что проявлялось однонаправленной тенденцией к уменьшению продуктов ПОЛ. В первой группе подобной динамики показателей окислительных процессов не отмечено.

Таблица 2.

Динамика показателей окислительных процессов у больных миастенией

Показатели	Первая группа (стандартная терапия)	Вторая группа (стандартная терапия+озонированный физиологический раствор)	Уровень достоверности различий р
Imax, мВ	354,1±98,5	154,3±47,4	р=0,026
S, мВ	1523,7±396,2	836,8±301,6	р=0,032
Z	5,0±0,3	5,4±0,4	р=0,031
tg(-2α)	168,2±49,2	62,8±20,0	р=0,045
ДК, отн. ед.	0,2575± 0,0074	0,2641± 0,0012	р=0,017
ТК, отн. ед.	0,2437± 0,0200	0,2448± 0,0110	р=0,022
ОШ, отн. ед.	67,3022± 13,2723	45,9685± 7,9720	р=0,028
ОШ/ (ДК+ТК)	136,2095± 26,0463	88,7769± 13,9451	р=0,025

Таким образом, выявленное повышение показателей индуцированной биохемилюминесценции и уровня продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови больных миастенией свидетельствует о нарушении процессов свободнорадикального окисления, сопровождающихся снижением работы и скорости восстановления антиоксидантной системы защиты, повышением продукции свободных радикалов, а также накоплением первичных и конечных продуктов перекисного окисления липидов. Это подтверждает значимость оксидантного стресса в патогенезе заболевания. Включение в терапевтический комплекс озонотерапии является патогенетически обоснованным, поскольку способствует восстановлению окислительного гомеостаза.

ЛИТЕРАТУРА

1. Санадзе А.Г. Миастения и миастенические синдромы. ― М.: ЛитТерра, 2012. ― 255 с.
2. Конькова Д.Ю. История исследования миастении: от описания симптомов доизучения патогенеза // Дальневосточный медицинский журнал. ― 2015. ― №1. ― С. 103-107.
3. Лобзин С.В., Чухловина М.Л., Руденко Д.И., Косачев В.Д. Способ прогнозирования осложнений тимэктомии у больных миастенией // Иммунология. ― 1981. ― №3. ― С. 55-58.
4. Васильева Е.М., Баканов М.И. Биохимические изменения при неврологической патологии // Биомедицинская химия. ― №6. ― С. 581-602.
5. Di Dalmazi G., Hirshberg J., Lyle D., Freij J.B., Caturegli P. Reactive oxygen species in organ-specific autoimmunity // Autoimmunity Highlights. ― Vol. 7 (1). http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs13317-016-0083-0#article-dates-history
6. Миненков А.А., Филимонов Р.М., Покровский В.И., Змызгова А.В., Побединский Н.М. Основные принципы и тактика озонотерапии. Пособие для врачей. ― М., 2001. ― 37 с.
7. Масленников О.В., Конторщикова К.Н. Практическая озонотерапия. Пособие. ― Нижний Новгород: Вектор – ТиС, 2003. ― 52 с.
8. Алекберов Д.Г., Потанин В.П., Белопухов В.М. Биологические механизмы озонотерапии и эффективность его применения в медицине // Пермский медицинский журнал. ― 2007. ― Т. 14, №4. ― С. 138-141.
9. Малахов В.А., Джанелидзе Т.Т. Озонотерапия в неврологии // Международный неврологический журнал. ― 2008. ― №2. ― С. 152-159.
10. Куликов А.Г. Озонотерапия ― эффективный физический метод лечения и реабилитации // Медиаль. ― 2013. ― №4 (9). ― С. 8-9.

REFERNCES

1. Sanadze A.G. Miasteniya i miastenicheskie sindromy [Myasthenia gravis and myasthenic syndromes]. Moscow: LitTerra, 2012. 255 p.
2. Kon’kova D.Yu. History of the study of myasthenia gravis: from the description of the symptoms of pre-examination of pathogenesis. Dal’nevostochnyy meditsinskiy zhurnal, 2015, no. 1, pp. 103-107 (in Russ.).
3. Lobzin S.V., Chukhlovina M.L., Rudenko D.I., Kosachev V.D. A method for predicting the complications of thymectomy in patients with myasthenia gravis. Immunologiya, 1981, no. 3, pp. 55-58 (in Russ.).
4. Vasil’eva E.M., Bakanov M.I. Biochemical changes in neurological pathology. Biomeditsinskaya khimiya, no. 6, pp. 581-602 (in Russ.).
5. Di Dalmazi G., Hirshberg J., Lyle D., Freij J.B., Caturegli P. Reactive oxygen species in organ-specific autoimmunity. Autoimmunity Highlights, vol. 7 (1), available at: http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs13317-016-0083-0#article-dates-history
6. Minenkov A.A., Filimonov R.M., Pokrovskiy V.I., Zmyzgova A.V., Pobedinskiy N.M. Osnovnye printsipy i taktika ozonoterapii. Posobie dlya vrachey [Basic principles and tactics of ozonotherapy. A manual for doctors]. Moscow, 2001. 37 p.
7. Maslennikov O.V., Kontorshchikova K.N. Prakticheskaya ozonoterapiya. Posobie [Practical ozonotherapy. Allowance]. Nizhniy Novgorod: Vektor – TiS, 2003. 52 p.
8. Alekberov D.G., Potanin V.P., Belopukhov V.M. Biological mechanisms of ozonotherapy and its effectiveness in medicine. Permskiy meditsinskiy zhurnal, 2007, vol. 14, no. 4, pp. 138-141 (in Russ.).
9. Malakhov V.A., Dzhanelidze T.T. Ozonotherapy in Neurology. Mezhdunarodnyy nevrologicheskiy zhurnal, 2008, no. 2, pp. 152-159 (in Russ.).
10. Kulikov A.G. Ozonotherapy is an effective physical method of treatment and rehabilitation. Medial’, 2013, no. 4 (9), pp. 8-9 (in Russ.).