Л.Ф. АХМАДИЕВА, Т.Г. МАЛАНИЧЕВА, Е.В. АГАФОНОВА

Казанский государственный медицинский университет, 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, д. 49

Ахмадиева Лилия Фаильевна — аспирант кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета, тел. (843) 268-58-21, e-mail: lilec5@mail.ru

Маланичева Татьяна Геннадьевна — доктор медицинских наук, профессор кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета, тел. (843) 268-58-21, e-mail: tgmal@mail.ru

Агафонова Елена Валентиновна — кандидат медицинских наук, ассистент кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета, тел. (843) 268-58-21, e-mail: agafono@mail.ru

Для изучения особенностей мукозального иммунитета в условиях колонизации полости носа грибами рода Candida обследовано 60 детей с круглогодичным аллергическим ринитом (КАР) в возрасте от 3 до 18 лет. Основную группу составили 30 детей с КАР, у которых в мазках отпечатках со слизистой оболочки полости носа обнаружены грибы рода Candida. В группу сравнения вошло 30 детей с КАР без колонизации слизистой оболочки полости носа грибковой микрофлорой. Выявлено, что у детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Candida, отмечается более высокий уровень показателей атопического типа реагировании: повышение уровня sIgE и эозинофилии в назальном секрете, увеличение количества IL-4. Повышенная продукция IL-10 способствует снижению выработки IFNγ и усилению дисбаланса цитокинового профиля, что ведет к уменьшению уровня sIgA, угнетению миграцию нейтрофилов в полость носа и их функциональной активности. Нарушения иммунологической реактивности на уровне слизистой оболочки полости носа являются основанием для назначения в составе комплексного лечения топической иммунокорригирующей терапии.

Ключевые слова: дети, круглогодичный аллергический ринит, мукозальный иммунитет.

 

L.F. AKHMADIEVA, T.G. MALANICHEVA, E.V. AGAPHONOVA

Kazan State Medical University, 49 Butlerov St., Kazan, Russian Federation, 420012

State of mucosal immunity in children with perennial allergic rhinitis associated with Candida species

Akhmadieva L.F. — postgraduate student of the Department of propaedeutics childhood diseases and faculty pediatrics with a course of childhood diseases of medical faculty, tel. (843) 268-58-21, e-mail: lilec5@mail.ru

Malanicheva T.G. — D. Med. Sc., Professor of the Department of propaedeutics childhood diseases and faculty pediatrics with a course of childhood diseases of medical faculty, tel. (843) 268-58-21, e-mail: tgmal@mail.ru

Agaphonova E.V. — Cand. Med. Sc., Assistant of the Department of propaedeutics childhood diseases and faculty pediatrics with a course of childhood diseases of medical faculty, tel. (843) 268-58-21, e-mail: agafono@mail.ru

To study the characteristics of mucosal immunity in a nasal colonization of Candida species were examined 60 children with perennial allergic rhinitis (PAR) aged between 3 and 18. The main group comprised of 30 children with PAR, whose impression smears of mucous tunic of the nose had fungi of the genus Candida. The comparison group included 30 children with PAR without colonization of the nasal mucosa of fungal microflora. It was found that children with PAR, associated with fungi of the genus Candida, have higher levels of performance such as atopic response: increased sIgE and eosinophils in nasal secretions, increased number of IL-4. Increased production of IL-10 contributes to reduction of IFNγ production and increasing imbalance of cytokine profile, which leads to reduced levels of sIgA, inhibition of neutrophis migration into nasal cavity and their functional activity. Violations of immunological reactivity at the level of the nasal mucosa are the basis for the appointment within comprehensive treatment of topical immunocorrecting therapy.

Key words: children, perennial allergic rhinitis, mucosal immunity.

 

В настоящее время в условиях экологического неблагополучия одним из факторов, приводящих к утяжелению течения круглогодичного аллергического ринита (КАР), является нарушение назального микробиоценоза с активацией условно-патогенной флоры [1, 2]. Проведенные исследования по изучению микробиоценоза слизистой оболочки полости носа указывают на доминирование стафилококковой инфекции у больных аллергическим ринитом [3, 4]. Данные U. Gluck (2003) показали, что условно-патогенные микробы высевались у 90% больных аллергическим ринитом, а у здоровых — лишь в 36% случаев [5]. Данные бактериологического и микологического исследования слизистой оболочки полости носа у детей с КАР нередко выявляют колонизацию не только Staphylococcus aureus, но и грибами рода Candida albicans [6-8]. Высев грибковой флоры у пациентов с АР способствует развитию вторичной иммунной недостаточности и усугубляет течение КАР.

Аллергическое воспаление на уровне полости носа и высев грибковой флоры у пациентов с КАР способствуют формированию нарушений мукозального иммунитета. В педиатрической практике в последние годы активно используются неинвазивные методы диагностики, а весьма перспективным представляется исследование цитоморфологических и воспалительных сдвигов на местном уровне при оценке показателей назального секрета у детей с КАР.

Исходя из вышеизложенного, представляет интерес изучение и состояния мукозального иммунитета при КАР, ассоциированном с грибами рода Candida, что позволит расширить знания по данной проблеме и максимально персонифицировать проводимую терапию.

Материал и методы

Для изучения особенностей мукозального иммунитета в условиях колонизации полости носа грибами рода Candida обследованы 60 детей с КАР в возрасте от 3 до 18 лет. Основную группу составили 30 детей с КАР, у которых в мазках отпечатках со слизистой оболочки полости носа обнаружены грибы рода Candida. В группу сравнения вошло 30 детей с КАР без колонизации слизистой оболочки полости носа грибковой микрофлорой.

Назальный секрет собирали на смоченный физиологическим раствором ватный тупфер из-под средней носовой раковины в течение 30 секунд, затем переносили в 0,25 мл физиологического растворa, центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 минут для осаждения целых клеточных элементов, отбирали надосадочную жидкость, замораживали при температуре -22⁰С.

В назальном секрете определяли процентное соотношение клеточных элементов с оценкой показателей, характеризующих фагоцитарную активность нейтрофилов — ФАН 1 и ФАН 2. ФАН 1 вычисляли по проценту фагоцитирующих аутофлору нейтрофилов, а ФАН 2 — по проценту деструктурированных нейтрофилов в цитоплазме в которых сохранялись целые микроорганизмы, что является показателем незавершенности фагоцитоза. Кроме этого, определяли уровень локальной продукции sIgЕ и sIgA и показатели цитокинового профиля IL-4, IL-10, IFN γ.

Исследование общего секреторного иммуноглобулина IgЕ (sIgЕ) в назальном секрете проводили иммуноферментным планшетным методом с помощью тест-системам «Хема-Медика» (г. Москва). Для определение концентрации sIgA использовали наборы «IgА секреторный-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск), а для оценки уровней IL-4, IL-10, IFNγ — наборы «Интерлейкин-4-ИФА-БЕСТ», «Гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ» и «Интерлейкин-10-ИФА-БЕСТ», (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск) согласно инструкциям фирмы производителя.

Результаты исследования и их обсуждение

Изучение особенностей риноцитограммы при КАР, ассоциированным с грибами рода Candidа у детей в сравнении с КАР, без грибковой колонизации, выявило значительные различия клеточного состава в периоде обострения и в стадии ремиссии заболевания (табл. 1). Так, у детей основной группы в стадии обострения выявлялась выраженная эозинофилия, однако достоверных различий по уровню эозинофилов между сравниваемыми группами не отмечалось. В стадии ремиссии количество эозинофилов в основной группе достоверно превышало показатели группы сравнения (р<0,05).

Таблица 1.

Особенности цитологического профиля риноцитограммы у детей с КАР в сравниваемых группах

Клеточный состав	Группа сравнения		Основная группа
	Ремиссия	Обострение	Ремиссия	Обострение
Нейтрофилы	59,92±3,43* **	34,29±3,23* **	24,56±4,45* **	8,56±2,25* **
Эозинофилы	15,51±1,97* **	39,52±2,78* **	22,67±3,23* **	38,67±2,69* **
Лимфоциты	12,61±1,22	19,67±2,89	16,98±2,23	14,21±2,78
Эпителиальные Клетки	11,92±1,02* **	6,54±0,78* **	35,79±2,78*	38,79±3,18*
ФАН 1	2,91±0,02* **	2,52±0,01* **	1,23±0,01* **	0,63±0,01* **
ФАН 2	1,21±0,01* **	1,52±0,01* **	1,76±0,01* **	3,04±0,01* **

Примечание: * — различия достоверны между основной группой и группой сравнения (р<0,05);

                        ** — различия достоверны внутри сравниваемых групп (р<0,05 )

У детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Candidа, выявлены изменения со стороны других клеточных популяций, что проявилось значительным снижением количества нейтрофилов в назальном секрете, чем в группе сравнения (p<0,05), как в периоде обострения, так и ремиссии заболевания. Кроме этого, имело место в основной группе пациентов повышение содержания эпителиальных клеток не только в стадии обострения, но и в периоде ремиссии (p<0,05).

В периоде обострения в основной группе пациентов на фоне уменьшение локального выхода нейтрофилов в риноцитограмме отмечалось угнетение функционального состояния нейтрофилов и снижение количества фагоцитирующих аутофлору нейтрофилов (ФАН 1) в 4 раза, и повышении процента деструктурированных нейтрофилов с сохраненными целыми микроорганизмами (ФАН 2) в 2 раза по сравнению с группой сравнения.

Помимо изучения цитологического профиля мазков отпечатков со слизистой полости носа у детей с КАР, ассоциированном с грибами рода Candidа исследованы некоторые показатели гуморального мукозального иммунитета, в частности секреторные IgЕ (sIgЕ) и IgA (sIgA).

Таблица 2.

Показатели гуморального мукозального иммунитета у детей с КАР в сравниваемых группах

Показатели гуморального иммунитета	Группа сравнения		Основная группа
	Ремиссия	Обострение	Ремиссия	Обострение
sIgЕ МЕ/мл	25,38±0,87* **	38,17±3,21* **	44,61±0,87* **	65,21±2,31* **
sIgA мкг/мл	189,12±12,13*	157,67±21,11*	115,12±10,63* **	79,27±11,27* **

Примечание: * — различия достоверны между основной группой и группой сравнения (р<0,05);

** — различия достоверны внутри сравниваемых групп (р<0,05)

 

Сравнение показателей гуморального звена иммунитета в назальном секрете у детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Candidа в сравнении с детьми с КАР без грибковой колонизации слизистой оболочки полости носа выявило значительные различия уровней sIgЕ и sIgA (табл. 2). Так, содержание sIgЕ в назальном секрете в основной группе детей достоверно выше (р<0,05), чем в группе сравнения в периоде обострения заболевания и в ремиссии. Это, вероятно, связано с тем, что грибы рода Caпdida, колонизируя на слизистой оболочке, выступают как специфический триггер, способствуя увеличению локального синтеза IgE, тем самым поддерживают хроническое воспаление слизистой оболочки полости носа.

Уровень sIgA у детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Caпdida достоверно ниже, чем в группе сравнения (р<0,05) в периоде обострения и в ремиссии заболевания. Причем в основной группе детей в сталии ремиссии отмечается повышение количества sIgA в 1,4 раза, а в группе сравнения — только в 1,2 раза. Известно, что sIgA обладает способностью связывать токсины и вместе с лизоцимом проявляет антимикробную активность. При снижении sIgA создаются условия для активации условно-патогенной флоры, в частности грибов рода Сandida.

Таблица 3.

Цитокиновый профиль у детей с КАР в сравниваемых группах

Цитокиновый профиль	Группа сравнения		Основная группа
	Ремиссия	Обострение	Ремиссия	Обострение
IL-4 pg/ml	7,33±0,71* **	20,23±1,7* **1	12,12±1,21* **	38,12±1,21* **
IFNγ pg/ml	120,61 ±4,89* **	93,45±2,88* **	80,81±4,39* **	66,89±7,19* **
IL-10 pg/ml	1,91±0,42*	1,78±0,43*	2,51±0,29* **	3,82±0,31* **

      Примечание: * — различия достоверны между основной группой и группой сравнения (р<0,05)

                  ** — различия достоверны внутри сравниваемых групп (р<0,05)

 

Изучение цитокинового профиля в назальном секрете (IL-4, IFNγ, IL-10) у детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Candidа по сравнению с КАР, без грибковой колонизации слизистой выявило более выраженные изменения изучаемых показателей (табл. 3). Выявлено достоверное повышение содержания IL-4, ответственного за реализацию атопического воспаления по сравнению с группой сравнения (p<0,05). Максимальное количество IL-4 выявлено при обострении КАР, который было выше (p<0,05) как по сравнению с основной группой в стадии ремиссии, так и с группой сравнения в периоде обострении.

Уровень γ-интерферона (IFNγ) у детей с КАР из основной группы в периоде обострения был достоверно ниже (p<0,05), чем в группе сравнения. Количество IFNγ в основной группе в стадии ремиссии достоверно повышалось (p<0,05), но его значения оставались достоверно ниже, чем в группе сравнения, что характеризовало наличие дисрегуляции Тh1/Тh2 баланса даже в стадии ремиссии КАР.

Рисунок 1. Уровень IL-10 в назальном секрете у больных КАР в сравниваемых группах

Изучение уровня IL-10 в назальном секрете у детей с КАР, ассоциированным с грибами рода Candida, показало достоверное увеличение по сравнению с КАР без грибковой колонизации, как в периоде обострения, так и в стадии ремиссии (p<0,05).

Изучение взаимосвязей интерлейкинов с показателями риноцитограммы у детей КАР, имеющим колонизацию слизистой оболочки полости носа грибами рода Candida, показало прямые корреляции между уровнем IL-10 и функциональными характеристиками нейтрофилов назального секрета: ФАН 1 (r=0,65; p<0,05) и ФАН 2 (r=0,75; p<0,05). Для IFNγ в основной группе больных выявлены обратные корреляции — для ФАН 1 (r= -0,32; p<0,05) и ФАН 2 (r= -0,39; p<0,05).

Таким образом, изучение состояния мукозального иммунитета при КАР, ассоциированном с грибами рода Candida выявило более высокий уровень показателей атопического типа реагировании: повышение уровня sIgE, и эозинофилов в назальном секрете, увеличение количества IL-4. Повышенная продукция ИЛ-10 способствует депрессированию выработки IFNγ и усилению дисбаланса цитокинового профиля, что способствует снижению уровня sIgA, угнетению миграцию нейтрофилов в полость носа и их функциональной активности. Это, вероятно, связано с тем, что грибы рода Caпdida, колонизируя на слизистой оболочке, оказывают не только повреждающее действие на нее, усиливая выработку медиаторов воспаления, но и выступают как специфический триггер, тем самым, поддерживая хроническое воспаление, как аллергического, так и инфекционного генеза.

Исследование параметров мукозального иммунитета слизистой оболочки полости носа, включающее риноцитограмму, цитокиновый профиль, уровни локальной секреции IgE и IgА возможно использовать для оценки активности аллергического воспаления и диагностики локальной иммунной недостаточности, вызываемой персистенцией грибов рода Candidа. Нарушения иммунологической реактивности на уровне слизистой оболочки полости носа являются основанием для назначения в составе комплексного лечения топической иммунокорригирующей терапии.

 

 

ЛИТЕРАТУРА

1. Зайцева О.В. Аллергический ринит: диагностика и лечение // Лечащий врач. — 2010. — №5. — С. 28-31.
2. Roberts G., Xatzipsalti M., Borrego L.M., Custovic A., Halken S., Hellings P.W., Papadopoulos N.G, Rotiroti G., Scadding G., Timmermans F., Valovirta E. Paediatric rhinitis: position paper of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology // Allergy. — 2013. Vol. 68. — Р. 1102-1116.
3. Романенко Э.Е., Багуро А.П., Мокропосова А.М. Микрофлора слизистой носа при аллергическом круглогодичном и инфекционном ринитах и инфекционном ринитах // Журнал микробиологии и эпидемиологии. — 2003. — №3. — С. 66-71.
4. Шарифуллина А.А. Микробиоцинозы слизистой оболочки полости носа у детей с различными вариантами аллергического ринита и подходы к терапии: автореф. дис. … канд. мед. наук. — Уфа, 2007. — 21 с.
5. Gluck U., Gebbcrs J. Local pathogenic bacteria in allergic rhinitis a novel concept of its pathogenesis // Otorhinolaryngol Relat Spec. — 2003. — Vol. 65, №4. — Р. 202-205.
6. Арефьева Н.А. Местная антибактериальная терапия в лечении больных аллергическим ринитом и бронхиальной астмой // Российская ринология. — 2004. — №1. — С. 58-60.
7. Гапоева Э.Т. Микробный биоценоз у больных аллергическим ринитом // Российская ринология. — 2005. — №2. — С. 45.
8. Маланичева Т.Г., Ахмадиева Л.Ф. Овчинникова А.Г..Денисова С.Н. Течение и комплексная терапия круглогодичного аллергического ринита с сопутствующей грибковой инфекцией у детей дошкольного возраста // Вопросы практической педиатрии. — 2013. — Т. 8, №5.

 

 

REFERENCES

1. Zaytseva O.V. Allergic rhinitis: diagnosis and treatment. Lechashchiy vrach, 2010, no. 5, pp. 28-31 (in Russ.).
2. Roberts G., Xatzipsalti M., Borrego L.M., Custovic A., Halken S., Hellings P.W., Papadopoulos N.G, Rotiroti G., Scadding G., Timmermans F., Valovirta E. Paediatric rhinitis: position paper of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology. Allergy, 2013, vol. 68, rr. 1102-1116.
3. Romanenko E.E., Baguro A.P., Mokroposova A.M. The microflora of nasal mucosa in allergic rhinitis year round, and infectious and infectious rhinitis. Zhurnal mikrobiologii i epidemiologii, 2003, no. 3, pp. 66-71 (in Russ.).
4. Sharifullina A.A. Mikrobiotsinozy slizistoy obolochki polosti nosa u detey s razlichnymi variantami allergicheskogo rinita i podkhody k terapii: avtoref. dis. … kand. med. nauk [Mikrobiotsinozy nasal mucosa in children with allergic rhinitis different options and approaches to therapy. Synopsis of dis. PhD med. sci]. Ufa, 2007. 21 p.
5. Gluck U., Gebbcrs J. Local pathogenic bacteria in allergic rhinitis a novel concept of its pathogenesis. Otorhinolaryngol Relat Spec., 2003, vol. 65, no. 4, rr. 202-205.
6. Aref’eva N.A. Local antibiotic therapy in the treatment of patients with allergic rhinitis and bronchial asthma. Rossiyskaya rinologiya, 2004, no.1, pp. 58-60 (in Russ.).
7. Gapoeva E.T. Microbial biocoenosis in patients with allergic rhinitis. Rossiyskaya rinologiya, 2005, no. 2, p. 45 (in Russ.).
8. Malanicheva T.G., Akhmadieva L.F. Ovchinnikova A.G., Denisova S.N. Current and comprehensive treatment of perennial allergic rhinitis with concomitant fungal infection in preschool children. Voprosy prakticheskoy pediatrii, 2013, vol. 8, no. 5 (in Russ.).