З.Ш. МИННУЛЛИНА¹, С.В. КИЯШКО², К.С. МАКАРОВА¹, Р.Г. САЙФУТДИНОВ¹, Т.В. САЙФУТДИНОВА¹

¹Казанская государственная медицинская академия, 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, д. 36

²Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Татарстан, 420087, г. Казань, пр. Ф. Амирхана, д. 34а

Миннуллина Зухра Шамилевна—аспирант кафедры терапии, тел. +7-919-641-77-00, e-mail: zukhra-minnullina@yandex.ru

Кияшко Станислав Вениаминович — кандидат химических наук, заведующий отделом санитарно-химических и токсико-гигиенических исследований, эксперт по аккредитации, тел. (843) 556-07-37, e-mail: kstv57@gmail.com

Макарова Ксения Сергеевна — аспирант кафедры терапии, тел. +7-905-311-21-92, e-mail: kseny-m@yandex.ru

Сайфутдинов Рафик Галимзянович — профессор, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой терапии, тел. (843) 236-87-86, e-mail: rgsbancorp@mail.ru

Сайфутдинова Татьяна Васильевна — ассистент кафедры терапии и семейной медицины, тел. +7-917-878-51-09, e-mail: saifutdinova t@mail.ru

В статье представлены данные о содержании неконъюгированных желчных кислот в сыворотке крови здоровых людей. Для определения желчных кислот использован газо-жидкостный хроматограф «Хромос ГХ-1000» (Россия). Концентрация холевой кислоты составила 2,85±0,008 мг/мл, хенодезоксихолевой — 2,79±0,01 мг/мл, литохолевой — 3,09±0,009 мг/мл, дезоксихолевой — 1,33±0,01 мг/мл, урсодезоксихолевой кислоты — 0,3±0,005 мг/мл, сумма — 10,36±0,03 мг/мл.

Ключевые слова: газожидкостная хроматография, кровь, желчные кислоты, здоровые люди.

Z.Sh. MINNULLINA¹, S.V. KIYASHKO², K.S. MAKAROVA¹, R.G. SAYFUTDINOV¹, T.V. SAYFUTDINOVA ¹

¹Kazan State Medical Academy, 36 Butlerov St., Kazan, Russian Federation, 420012

²Center of Hygiene and Epidemiology in the Republic of Tatarstan, 34a Phatykh Amirkhana Ave., Kazan, Russian Federation, 420087

Content of bile acids in blood serum of healthy people

Minnullina Z.Sh. — postgraduate student of the Department of Therapy, tel. +7-919-641-77-00, е-mail: zukhra-minnullina@yandex.ru

Kiyashko S.V. — Cand. Chem. Sc., Head of the Department of sanitary-chemical and toxic-hygienic studies, expert on accreditation, tel. (843) 556-07-37, e-mail: kstv57@gmail.com

Makarova K.S. — postgraduate student of the Department of Therapy, tel. +7-905-311-21-92, e-mail: kseny-m@yandex.ru

Sayfutdinov R.G. — Professor, D. Med. Sc., Head of the Department of Therapy, tel. (843) 236-87-86, e-mail: rgsbancorp@mail.ru

Sayfutdinova T.V. — assistant of the Department of Therapy and Family Medicine, tel. +7-917-878-51-09, e-mail: saifutdinova t@mail.ru

This article presents data on unconjugated bile acids in blood serum of healthy people. To determine the bile acid gas-liquid chromatograph «Chromos GC-1000» (Russia) was used. The concentration of cholic acid was 2,85±0,008 mg/ml, chenodeoxycholic — 2,79±0,01 mg/ml, lithocholic — 3,09±0,009 mg/ml, deoxycholic — 1,33±0,01, ursodeoxycholic acid — 0,3±0,005 mg/ml, the amount — 10,36±0,03 mg/ml.

Key words: gas-liquid chromatography, blood, bile acids, healthy people.

В последнее время установлено, что желчные кислоты (ЖК), кроме участия в работе желудочно-кишечного тракта, играют важную роль при ряде патологических состояниях организма. При увеличении уровня ЖК в крови происходит угнетение как моносинаптических, так и полисинаптических рефлекторных реакций. ЖК, проникая через гемато-энцефалический барьер изменяют функциональное состояние спинномозговых центров, возбудимость и аккомодацию двигательного аппарата [1]. Соли ЖК (холаты, дезоксихолаты, монокетохолаты и таурохолаты) способствуют накоплению родамина-123 в клетках эндотелия мозга крыс, увеличивая текучесть мембраны клеток [2]. Снижение возбудимости нерва наиболее выражено при действии дезоксихолата натрия, наименее — под влиянием холата натрия [3, 4]. Повышение уровня ЖК в крови, а значит и в нервной системе вызывает угнетение ее возбудимости и уменьшение соответствующих симптомов при ряде заболеваний. Показано неблагоприятное влияние желчных кислот в крови у детей на состояние их свертывающей системы [5]. Повышение содержания желчных кислот в крови изменяет дыхательную функцию новозеландских кроликов [6]. Поэтому в последнее время исследуется уровень ЖК в крови не только при поражении гепатобилиарной, но и нервной системы (болезнях Альцгеймера, эпилепсии и др.). На основании этих данных разрабатываются схемы лечения этих болезней препаратами ЖК [7, 8].

В связи с этим количественное определение желчных кислот в сыворотке крови приобретает важное значение в целях диагностики и оценки эффективности лечения ряда заболеваний. Значительное распространение заболеваний печени и желчевыделительной системы, а также трудности распознавания их побуждают искать более надежные и достаточно информативные методы их диагностики [9]. В связи с этим количественное определение желчных кислот в сыворотке крови приобретает большое значение в целях диагностики и оценки эффективности лечения патологии гепатобилиарной системы. Ранее существующие спектрофотометрические и флюрометрические методы исследования желчных кислот в сыворотке крови, к сожалению, слишком трудоемки и менее информативны [10-14]. В связи с этим необходимы новые, более чувствительные и доступные способы определения желчных кислот в сыворотке крови.

Цель работы — оценка содержания неконъюгированных желчных кислот в крови здоровых людей.

Материал и методы

Обследован 51 здоровый человек. Средний возраст составил 57,01±1,8 года (мужчин — 14 чел., средний возраст 60,1±3,51 года; женщин — 37 чел., средний возраст 55,9±2,1 года). Для количественного определения желчных кислот в крови нами был выбран метод газожидкостной хроматографии. Оценивали содержание первичных ЖК: холевой, хенодезоксихолевой; вторичных: литохолевой, дезоксихолевой и третичной: урсодезоксихолевой кислоты. Указанные кислоты определяли в сыворотке крови на хроматографе «Хромос ГХ-1000» (Россия).

Статистический анализ материала осуществляли по программе Microsoft Excell. При нормальном распределении определяли среднюю арифметическую (М) и ошибку средней (М±m). Показатели считали значимыми при р<0,05.

Полученные результаты и их обсуждение

Хроматограмма тестовой смеси желчных кислот, добавленных к сыворотке крови в количестве 0,2 мг/мл, представлена на рис. 1.

Рисунок 1. Хроматограмма желчных кислот сыворотки крови человека

Как видно из данной хроматограммы, метод достаточно чувствителен для определения реального содержания желчных кислот. При этом суммарная концентрация (мужчины + женщины) желчных кислот составила (табл. 1): холевой — 2,85±0,008 мг/мл, хенодезоксихолевой — 2,79±0,01 мг/мл, литохолевой — 3,09±0,009 мг/мл, дезоксихолевой — 1,33±0,01 мг/мл и урсодезоксихолевой кислоты — 0,3±0,005 мг/мл, в сумме 10,36±0,03 мг/мл.

Таблица 1.

Содержание ЖК (M±m) в крови здоровых лиц

Пол не оказывает влияния на содержание желчных кислот. Также не отмечено влияние возраста на их содержание в крови. Эти данные сопоставимы с результатами предыдущих исследователей [15, 16].

Выводы

Таким образом, определение основных желчных кислот в сыворотки крови методом ГЖХ является достаточно информативным. Практическая значимость метода заключается в том, что эти данные можно использовать для дифференциации различной патологии печени и желчевыделительной системы. А также для изучения клиренса желчных кислот в нагрузочных пробах. Точное определение содержания желчных кислот в сыворотке крови приобретает особое значение для оценки эффективности лечения при использовании различных литолитических препаратов с целью химического растворения желчных камней в случае желчнокаменной болезни. Результаты исследования состава и содержания желчных кислот могут быть применены для определения функционального состояния гепатобилиарной системы. Очевидна перспективность развития всесторонних исследований по выявлению существующей связи между химией желчных кислот и других компонентов желчи, включая их трансформацию и методы определения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Moseley R.H. Liver and biliary tract // Curr. Opin.Gastroenterol. — 2007. — Vol. — P. 181-184.
2. Wang F. Effect of high blood levels of bile acid on respiratory functions of New Zealand rabbits / F. Wang, C. Zhao, Y. Tian, Y. Yin // Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. — 2013. — 33(8). — Р. 1181-1184.
3. Андрейчин М.А. Содержание желчных кислот в сыворотке крови больных хроническими воспалительными заболеваниями печени и желчных путей / М.А. Андрейчин, Е.В. Бойко, О.И. Иващенко // Клиническая медицина. — 1976. — Т. 54, — №4. — С. 107-109.
4. Janzen N. Rapid quantification of conjugated and unconjugated bile acids and C27 precursors in dried blood spots and small volumes of serum / N. Janzen, S. Sander, M. Terhardt, A.M. Das et al. // J Lipid Res. — 2010. — Vol. 51(6) — P. 1591-1598.
5. Magnusson M. Bile acids and coagulation factors: paradoxical association in children with chronic liver disease / M. Magnusson, B. Fischler, J. Svensson, P. Petrini, S. Schulman, A. Németh // Eur J Gastroenterol Hepatol. — 2013. — 25(2). — Р. 152-158.
6. Lefkowitch J.H. Hepatobiliary pathology // Curr. Opin. — 2006. — Vol. 19. — P. 185-193.
7. Буеверов А.О. Клинические аспекты изучения апоптоза при хронических вирусных гепатитах / А.О. Буеверов, А.Е. Грязин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2006. — №2. — С. 4-10.
8. Бурка А.А. Определение содержания желчных кислот в сыворотке крови больных острым холециститом / А.А. Бурка, В.С. Неборачко // Клиническая хирургия. — 1977. — №12. — С. 18-21.
9. Ганиткевич Я.В. Роль желчи и желчных кислот в физиологии и патологии организма. — Киев: Наукова думка, 1980. — 180 с.
10. Лазебник Л.Б. Атерогенная дислипидемия и инсулинорезистентность, ассоциированные с неалкогольной жировой болезнью печени (сходства и различия), дифференцированный подход к терапии / Л.Б. Лазебник, Л.А. Звенигородская, Н.В. Мельникова и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. — 2009. — №3. — С. 69-77.
11. Громашевская Л.Л. Желчные кислоты в сыворотке крови в норме и при патологических состояниях печени / Л.Л. Громашевская, В.С. Неборачко // Успехи гепатологии. — Рига, 1982. — Вып. 16. — С. 139-146.
12. Иванченкова Р.А. Диагностическое значение определения желчных кислот сыворотки крови при желчнокаменной болезни / Р.А. Иванченкова, Д.В. Бочарова, П.С. Ветшев и др. // Советская медицина. — 1985. — №5. — С. 106-110.
13. Kichian K. Nonalcoholic fatty liver disease in patients investigated for elevated liver enzymes / K. Kichian, L.M. Gramlich, V.G. Bain et al. // Clin and Invest. Med. — 2009. — Vol. 4. — P. 199-200.
14. Yang L. Mechanistic studies of the effect of bile salts on rhodamine 123 uptake into RBE4 cells / L. Yang, J.P. Fawcett, J. Ostergaard, H. Zhang, I.G. Tucker // Mol Pharm. — 2012. — Vol. 9(1). — С. 29-36.
15. Mikov M. Pharmacology of bile acids and their derivatives: absorption promoters and therapeutic agents / M. Mikov, J.P. Fawcett, K. Kuhajda, S. Kevresan // Eur J Drug Metab Pharmacokinet. — 2006. — Vol. 31(3). — Р. 237-51.
16. Parry G.J. Safety, tolerability, and cerebrospinal fluid penetration of ursodeoxycholic Acid in patients with amyotrophic lateral sclerosis / G.J. Parry, C.M. Rodrigues, M.M. Aranha, S.J. Hilbert, C. Davey, r P. Kelka, W.C. Low, C.J. Steer // Clin Neuropharmacol. — 2010. — Vol. 33(1). — P. 17-21.

REFERENCES

1. Moseley R.H. Liver and biliary tract. Curr. Opin.Gastroenterol, 2007, vol. 19, pp. 181-184.
2. Wang F., Zhao C., Tian Y., Yin Y. Effect of high blood levels of bile acid on respiratory functions of New Zealand rabbits. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2013, vol. 33(8), rr. 1181-1184.
3. Andreychin M.A., Boyko E.V., Ivashchenko O.I. The content of bile acids in the serum of patients with chronic inflammatory diseases of the liver and biliary tract. Klinicheskaya meditsina, 1976, vol. 54, no. 4, pp. 107-109 (in Russ.).
4. Janzen N., Sander S., Terhardt M., Das A.M. et al. Rapid quantification of conjugated and unconjugated bile acids and C27 precursors in dried blood spots and small volumes of serum . J Lipid Res, 2010, vol. 51(6), pp. 1591-1598.
5. Magnusson M., Fischler B., Svensson J., Petrini P., Schulman S., Németh A. Bile acids and coagulation factors: paradoxical association in children with chronic liver disease. Eur J Gastroenterol Hepatol, 2013, vol. 25(2), rr. 152-158.
6. Lefkowitch J.H. Hepatobiliary pathology. Curr. Opin. Gastroenterol, 2006, vol. 19, pp. 185-193.
7. Bueverov A.O., Gryazin A.E. The clinical aspects of the study of apoptosis in chronic viral hepatitis. Rossiyskiy zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii, 2006, no. 2, pp. 4-10 (in Russ.).
8. Burka A.A., Neborachko V.S. Determination of serum bile acids in patients with acute cholecystitis. Klinicheskaya khirurgiya, 1977, no. 12, pp. 18-21 (in Russ.).
9. Ganitkevich Ya.V. Rol’ zhelchi i zhelchnykh kislot v fiziologii i patologii organizma [Role of bile and bile acids in the body physiology and pathology]. Kiev: Naukova dumka, 1980. 180 p.
10. Lazebnik L.B., Zvenigorodskaya L.A., Mel’nikova N.V. et al. Atherogenic dyslipidemia and insulin resistance associated with non-alcoholic fatty liver disease (similarities and differences), a differentiated approach to therapy. Kardiovaskulyarnaya terapiya i profilaktika, 2009, no. 3, pp. 69-77 (in Russ.).
11. Gromashevskaya L.L., Neborachko V.S. Zhelchnye kisloty v syvorotke krovi v norme i pri patologicheskikh sostoyaniyakh pecheni [Bile acids in the blood serum in normal and pathological conditions of the liver]. Uspekhi gepatologii. Riga, 1982. Iss. 16. Pp. 139-146.
12. Ivanchenkova R.A., Bocharova D.V., Vetshev P.S. et al. Diagnostic value of determination of serum bile acids in the blood of gallstone disease. Sovetskaya meditsina, 1985, no. 5, pp. 106-110 (in Russ.).
13. Kichian K., Gramlich L.M., Bain et V.G. al. Nonalcoholic fatty liver disease in patients investigated for elevated liver enzymes. Clin and Invest. Med, 2009, vol. 4, pp. 199-200.
14. Yang L., Fawcett J.P., Ostergaard J., Zhang H., Tucker I.G. Mechanistic studies of the effect of bile salts on rhodamine 123 uptake into RBE4 cells . Mol Pharm, 2012, vol. 9(1), pp. 29-36.
15. Mikov M., Fawcett J.P., Kuhajda K., Kevresan S. Pharmacology of bile acids and their derivatives: absorption promoters and therapeutic agents. Eur J Drug Metab Pharmacokinet, 2006, vol. 31(3), rr. 237-51.
16. Parry G.J., Rodrigues C.M., Aranha M.M., Hilbert S.J., Davey C., Kelka P., Low W.C., Steer C.J. Safety, tolerability, and cerebrospinal fluid penetration of ursodeoxycholic Acid in patients with amyotrophic lateral sclerosis. Clin Neuropharmacol, 2010, vol. 33(1), pp. 17-21.