Д.Д. МУХАМЕТОВА¹, Д.И. АБДУЛГАНИЕВА¹, О.Д. ЗИНКЕВИЧ², Н.А. САФИНА², А.Х. ОДИНЦОВА³

¹Казанский государственный медицинский университет, 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, д. 49

²Казанская государственная медицинская академия, 420012, г. Казань, ул. Муштари, д. 11

³Республиканская клиническая больница МЗ РТ, 420064, г. Казань, ул. Оренбургский Тракт, д. 138

Мухаметова Диляра Дамировна — аспирант кафедры госпитальной терапии, тел. +7-904-763-40-11, e-mail: muhdilyara@gmail.com¹

Абдулганиева Диана Ильдаровна — доктор медицинских наук, заведующая кафедрой госпитальной терапии с курсом эндокринологии, тел. +7-987-296-27-68, e-mail: diana_s@mail.ru¹

Зинкевич Олег Данилович — кандидат биологических наук,и.о. заведующего ЦНИЛ КГМА, тел.(843) 236-50-53, e-mail: zinkevich_oleg@mail.ru²

Сафина Нэлли Ахметовна — кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ЦНИЛ КГМА, тел.(843) 236-50-53, e-mail: nellyasafina@mail.ru²

Одинцова Альфия Харисовна — кандидат медицинских наук, заведующая отделением гастроэнтерологии, тел. +7-987-290-53-44, e-mail: odincovaa@yandex.ru³

В статье представлены результаты исследования показателей иммунного ответа к антигенам кишечной микрофлоры у больных с воспалительными заболеваниями кишечника. В исследование было включено 55 пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника в стадии обострения и 15 человек контрольной группы. У больных с язвенным колитом и болезнью Крона выявилось понижение специфических IgA, IgM и повышение IgG к большинству изучаемых антигенов по сравнению с контрольной группой. Данные изменения коррелировали с длительностью заболевания, эндоскопической активностью, клиникой и тяжестью заболевания.

Ключевые слова: кишечная микробиота, иммунный ответ, болезнь Крона, язвенный колит, воспалительные заболевания кишечника.

 

D.D. MUKHAMETOVA¹, D.I. ABDULGANIEVA¹, O.D. ZINKEVICH², N.A. SAPHINA²,

A.C. ODINTSOVA³

¹Kazan State Medical University

²Kazan State Medical Academy

³Republican Clinical Hospital

Immune response to the intestinal microbiota in inflammatory bowel disease

The article presents the results of a study of immune response to antigens of the intestinal microbiota in patients with inflammatory bowel disease. The study included 55 patients with flare of inflammatory bowel disease and 15 people in the control group. In patients with ulcerative colitis and Crohn’s disease were revealed specific reduction of Ig A, Ig M and rising of Ig G to most studied antigens in comparison with the control group. These changes correlated with duration of disease, endoscopic activity, clinical features and disease severity.

Key words:intestinal microbiota, immune response, Crohn’s disease, ulcerative colitis, inflammatory bowel diseases.

 

Одной из актуальных проблем в гастроэнтерологии были и остаются воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относятся болезнь Крона (БК) и язвенный колит (ЯК). По тяжести течения, частоте осложнений и летальности они занимают одну из ведущих позиций в структуре болезней пищеварительной системы [1].

В настоящее время выделяют следующие основные факторы, приводящие к развитию ВЗК: генетическая предрасположенность, факторы окружающей среды, комменсальная микробиота просвета кишечника и нарушения иммунного ответа [2].

По мнению C. Abraham и R.  Medzhitovиммунная система кишечника защищает организм хозяина от проникновения патогенов и транслокации резидентной микрофлоры при её чрезмерном росте [3]. Вместе с этим должна сохраняться иммунная толерантность к резидентным микробам кишечника. На экспериментальных моделях было показано, что нарушение этого баланса ассоциировано с кишечным воспалением и, можно предположить, является одним из условий возникновения воспалительных заболеваний кишечника у человека. Однако до конца остается непонятным, что запускает нарушения в функционировании иммунной системы [4].

В норме кишечный эпителий является эффективным барьером от транслокации различных антигенов из просвета кишки. Воспалительный процесс стенки кишки приводит к нарушению барьерной функции слизистой, стимулирует транслокацию бактериальных антигенов из просвета кишки и иммунный ответ к ним [5]. В конечном итоге иммунный ответ становится системным, что может выражаться в повышении концентрации сывороточных антибактериальных антител [6], косвенно отражая степень нарушения целостности барьера слизистой кишечника. Исходя из данного предположения мы провели исследование концентрации антител классов IgG, IgM и IgA у пациентов с болезнью Крона и язвенным колитом.

Цель исследования

Изучить состояние гуморального иммунного ответа к антигенам некоторых представителей микробиоты кишечника при ВЗК.

Материалы и методы

В исследование проспективно были включено 55 пациентов с ВЗК в стадии обострения (35 пациентов с ЯК, 20 с БК) и 15 здоровых добровольцев, составивших группу сравнения. У всех определялась концентрация циркулирующих иммунных комплексов, общих IgA, IgM и IgG и специфических IgA, IgM и IgG — к гликолипиду (ГЛП) Rе — мутанта Salmonellaminnesota, Bifidobacteriumbifidum, липополисахаридам (ЛПС) E.coli O14, белковым антигенам E.coli М 17, P.aeruginosa, P.mirabilis, C. albicans, K.pneumoniae, Strep. spp., S. aureus методом иммуноферментного анализа.

В качестве антигена эндотоксина использовали гликолипид S. minnesota RE 595 (Sigma, USA), ЛПС E.coli (Sigma, USA). В качестве антигенов P.mirabilis, P.aeruginosa, S. aureus, K. pneumonia, C. albicans и др. использовали ультразвуковые дезинтеграты этих бактерий, подвергнутые ультрацентрифугированию и гельфильтрации [7]. Концентрацию антител выражали в мкг/мл.

Средний возраст больных БК составил 30,7±5,2 года, ЯК — 38,1±4,2 года, в группе сравнения — 30,4±6,6 года. Мужчин и женщин при ЯК было 18 (51%) и 17 (49%), при БК — 9 (45%) и 11 (55%) соответственно.

По степени тяжести больные с БК распределились следующим образом: легкой степени тяжести — 7, средней — 6, тяжелой — 7 пациентов. При ЯК: легкой — 10, средней — 16, тяжелой — 9. Тяжесть обострения оценивалось по индексу активности БК (CDAI, индекс Беста) [8] и индексу активности ЯК (Мейо) [9].

Длительность заболевания составила 6,2±1,6 года. По течению пациенты с БК и ЯК, соответственно, распределились следующим образом: острое течение — 3 (15%) и 6 (17%), рецидивирующее — 16 (80%) и 25 (71,5%), непрерывно-рецидивирующее — 1 (5%) и 4 (11,5%).

Результатыи обсуждение

Нами было выявлено снижение уровня IgА при ЯК и БК к большинству определяемых антигенов кишечной микробиоты по сравнению с контрольной группой (табл. 1). Хотя показатель общего IgА у 91,7% пациентов с ЯК и 85% с БК находился в пределах нормы.

Таблица 1.

Уровень IgA у пациентов с ЯК и БК по сравнению с контрольной группой

№	Исследуемые антигены	Средние значения IgA, мкг/мл
		контроль	ЯК	БК
1	гликолипиду Rе — мутанта Salmonellaminnesota	0,014±0,002	0,008±0,001*	0,013±0,002
2	ЛПС E.coli O14	0,061±0,012	0,035±0,01*	0,037±0,009
3	Bifidobacteriumbifidum	0,023±0,003	0,013±0,002*	0,024±0,008
4	белковым антигенам E.coli М 17	0,41±0,09	0,2±0,05*	0,20±0,005
5	Pseudomonas aeruginosa	0,22±0,04	0,19±0,06	0,59±0,42
6	Proteus mirabilis	0,11±0,01	0,07±0,01*	0,11±0,03
7	Klebsiella pneumoniae	11,95±4,55	8,97±4,02	4,0±1,0
8	Staphylococcus aureus	17,24±5,90	29,5±12,88	26,49±17,0
9	Streptococcus spp.	25,67±7,03	30,15±13,4	27,9±15,38
10	Candida albicans	19,85±5,14	11,95±2,4	49,3±21,8

Примечание: * p<0,05

 

Известно, что IgA выполняет функцию изоляции в первой линии обороны, обеспечивает местный иммунитет желудочно-кишечного тракта. Имеющийся дефицит этих антител у пациентов с ВЗК описан и в литературе [10], а также в экспериментах на животных [11]. Таким образом, у пациентов с ВЗК нарушено противодействие к комменсальной микробиоте, создаются условия для колонизации ими кишечника и проникновения через слизистую кишечника растворимых антигенов.

При анализе показателя Ig M у наших пациентов, было выявлено, что уровень IgM был снижен при ЯК и БК ко всем антигенам изучаемой микробиоты по сравнению с контрольной группой (табл. 2).

Таблица 2.

Уровень IgM при ЯК и БК к некоторым представителям кишечной микробиоты по сравнению с группой контроля

№	Исследуемые антигены	Средние значения IgM, мкг/мл
		контроль	ЯК	БК
1	гликолипиду Rе — мутанта Salmonellaminnesota	7,24±2,47	5,12±1,56	3,50±1,47*
2	ЛПС E.coli O14	11,43±4,11	6,19±2,28*	5,21±2,05*
3	Bifidobacteriumbifidum	12,36±3,24	9,66±3,67*	7,85±2,98*
4	белковым антигенам E.coli М 17	27,15±12,41	24,24±10,58	11,37±4,26*
5	Pseudomonas aeruginosa	32,93±10,91	43,48±26,98	16,35±5,62*
6	Proteus mirabilis	21,30±11,82	19,04±7,67	9,58±3,56
7	Klebsiella pneumoniae	75,57±62,22	50,69±30,45	24,99±16,79*
8	Staphylococcus aureus	30,20±14,32	16,05±4,94	11,36±4,62*
9	Streptococcus spp.	32,08±10,66	21,12±6,29*	16,04±4,80*
10	Candida albicans	38,00±15,50	29,56±16,98	19,41±9,59*

Примечание: * p<0,05

 

Из данной таблицы видно, что при обострении ЯК и БК были снижены уровни антиэндотоксиновых IgM — к гликолипиду Rе — мутанта Salmonella minnesota (при БК — p<0,05) и ЛПС E.coli O14 (p<0,05). Эти антигены входят в состав ЛПС большинства патогенных и условно патогенных грамотрицательных бактерий, в частности энтеробактерий [12]. В литературе имеются данные о том, что бактериальные эндотоксины, попавшие во внутреннюю среду организма, способны играть определенную роль в патогенезе иммунопатологических состояний при ВЗК [13].

Анализ полученных данных выявил снижение IgM к Bifidobacterium bifidum (p<0,05), были снижены показатели IgMк основным грам-отрицательным представителям кишечной микробиоты — белковым антигенам E.coliМ 17 (при БК — p<0,05), P.aeruginosaпри БК (p<0,05), P.mirabilis, K.pneumoniae(при БК — p<0,05) и грам-положительным — S. aureus (при БК — p<0,05), Strep. spp. (p<0,05), а также к C.аlbicans (при БК — p<0,05). При ЯК отмечается повышение IgMк P.aeruginosa. При этомуровень общего IgM находится в пределах нормы у 100% пациентов с ВЗК. Известно, что этот вид антител появляется раньше всего при контакте с антигеном, нейтрализует крупные чужеродные клетки, активирует систему комплемента [14].

Однозначного объяснения снижения IgM к комменсальной микробиоте при обострении ЯК и БК не существует. Возможно, данное снижение вызвано феноменом «потребления», когда большая часть антител этого класса находится на периферии и поэтому отмечается относительное снижение центральном кровотоке. Также полученный факт может быть связан с тем, что ЯК и БК у данных пациентов протекает хронически и снижается способность В-лимфоцитов, находящихся в постоянной активации, к трансформации в плазматические клетки.

Было показано, что уровни IgG при ВЗК к большинству определяемых антигенов повышены (табл. 3).

Таблица 3.

Уровень IgG при ЯК и БК к некоторым представителям кишечной микробиоты по сравнению с группой контроля

№	Исследуемые антигены	Средние значения IgG, мкг/мл
		контроль	ЯК	БК
1	гликолипид Rе — мутанта Salmonellaminnesota	1,26±0,29	1,62±0,55	1,42±0,37
2	ЛПС E.coli O14	2,75±0,78	13,71±13,07	12,13±12,38
3	Bifidobacteriumbifidum	10,72±3,68	6,16±1,92*	5,60±2,20*
4	белковые антигены E.coli М 17	17,11±5,77	50,55±43,49	32,58±10,79*
5	Pseudomonas aeruginosa	11,23±3,61	18,14±4,04*	25,60±7,89*
6	Proteus mirabilis	12,75±3,86	19,13±4,51	24,05±7,53*
7	Klebsiella pneumoniae	48,43±27,60	57,63±17,65	86,27±50,79
8	Staphylococcus aureus	70,66±9,56	219,70±152,62	162,18±135,67
9	Streptococcus spp.	85,67±14,42	226,94±118,38	162,18±135,67
10	Candida albicans	111,64±77,32	127,32±59,93	139,71±90,96

Примечание: * p<0,05

 

Анализ полученных данных показал, повышение уровня антиэндотоксиновых антител IgG (гликолипиду Rе — мутанта Salmonella minnesota, ЛПС E.coli O14), IgGк белковым антигенам E.coli М 17 (при БК — р<0,05), P.aeruginosa (p<0,05), P.mirabilis (при БК — p<0,05), K.pneumoniae, S.aureus, Strep. spp. и C.аlbicans. При этом уровень общего IgGнаходится в пределах нормы у 62,5% больных с ЯК и 77% у больных с БК, повышен у 25% больных с ЯК.

Также отмечалось снижение Ig А, IgMи IgGк Bifidobacteriumbifidumпри ЯК (p<0,05) и IgM, IgG при БК (p<0,05). Имеющийся недостаток и самих этих бактерий, обладающих протективными свойствами, уменьшающих признаки воспаления, неоднократно подтвержден и в экспериментальных моделях ВЗК на мышах [15].

Известно, что IgGпоявляется спустя какое-то время после контакта с антигеном, образует иммунные комплексы, участвует в активации системы комплемента, стимулирует фагоцитоз.

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) у наших больных были повышены у 78,3% больных с ЯК и 81,8% больных с БК. Что также косвенно указывает на избыточное поступление антигена. ЦИК представляет собой комплекс антигена, антитела и компонента комплемента. Повышение этого показателя характерно для всех аутоиммунных заболеваний.

Нами было выявлено, что при увеличении тяжести БК и ЯК отмечалась тенденция к снижению IgM, при ЯК с увеличением тяжести заболевания достоверно снижались IgMк ГЛП Rе — мутанта Salmonella minnesota, ЛПС E.coli O14, Bifidobacterium bifidum, белковым антигенам E.coli М 17, P.aeruginosa, C.аlbicans; повышались IgGк P.aeruginosa и P.mirabilis; при БК снижались Ig М к ГЛП Re-мутанта Sal. minnesota, ЛПС E.coli O14 и Bifidobacterium bifidum.

Большинство показателей IgAи IgMкоррелировали с эндоскопической картиной пациентов с ЯК — с увеличением эндоскопической активности увеличиваются IgAк ГЛП Re-мутанта Sal. minnesota, ЛПС E.coli O14, Bifidobacterium bifidum, P.aeruginosa, P.mirabilis, K.pneumoniae, C.аlbicans и уменьшались IgMк ГЛП Re-мутанта Sal. minnesota, к белковым антигенам E.coli М 17, P.aeruginosa, P.mirabilis, K.pneumoniae, S. aureus и C.аlbicans.

Показатели гуморального иммунного ответа имели достоверные корреляции с клиническими проявлениями: при БК с повышением частоты стула понижалась концентрация IgM к ЛПС E.coli O14 и Bifidobacterium bifidum, с усилением абдоминальной боли уменьшались IgG к K.pneumoniae, с увеличением потери веса увеличивались Ig G к S. aureus и Strep. spp., с увеличением вздутия живота увеличивались IgG к ГЛП Re-мутанта Sal. minnesota; при ЯК с увеличением частоты стула уменьшались IgMк ГЛП Rе — мутанта Salmonella minnesota, ЛПС E.coli O14, с усилением болей в животе уменьшались IgMк ГЛП Re-мутанта Sal. minnesota, ЛПС E.coli O14, K.pneumoniae, Strep. spp., IgG к C.аlbicans и повышались IgGк P.mirabilis и IgAк Bifidobacterium bifidum. С увеличением количества тенезм увеличивались IgMк P.aeruginosa и Ig A к белковым антигенам E.coli М 17.

При анализе полученных данных выявлена корреляция с длительностью заболевания — с увеличением длительности БК уменьшались Ig G к S. aureu, Strep. spp. и с увеличением длительности ЯК также уменьшались Ig G к S. aureus, Strep. spp. и увеличивались IgAк белковым антигенам E.coli М 17, K.pneumoniae.

Выводы

1. У большинства больных с язвенным колитом и болезнью Крона в период обострения снижен уровень Ig А, IgM и повышен IgG к большинству антигенам кишечной микробиоты по сравнению с контрольной группой.

2. Была выявлена тенденция к снижению Ig M и повышению Ig G у более тяжелых больных при обострении воспалительных заболеваний кишечника.

3. Имелась корреляция всех классов специфических антител с длительность заболевания, эндоскопической картиной и особенностями клинического течения воспалительных заболеваний кишечника.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ткачев А.В., Мкртчян Л.С., Никитина К.Е. и др. Воспалительные заболевания кишечника: на перекрестке проблем // Практическая медицина. Гастроэнтерология. — 2012. — № 3 (12).

2. Sa’ad Y. Salim, Johan D. Söderholm. Importance of disrupted intestinal barrier in inflammatory bowel diseases // Inflammatory Bowel Diseases. — 2011 January. — Vol. 17, Issue 1. — Р. 362-381.

3. Abraham C., Medzhitov R. Interactions Between the Host Innate Immune System and Microbes in Inflammatory Bowel Disease // Gastroenterology. — 2011 May. — Vol. 140, Issue 6. — P. 1729-1737.

4. Wehkamp J., Antoni L., Ostaff M., Stange E.F. The Intestinal Barrier in Implications for Future Therapeutic Intervention // Falk Foundation e.V. — 2013. — P. 36-37.

5. Porras M., Martín M.T., Yang P.C. et al. Correlation between cyclical epithelial barrier dysfunction and bacterial translocation in the relapses of intestinal inflammation // Inflamm Bowel Dis. — 2006 Sep. — Vol. 12, № 9. — Р. 843-52.

6. Осадчая О.И., Боярская А.М. Влияние энтеросорбции на развитие гуморальных реакций иммунитета у больных с неспецифическим язвенным колитом // Газета «Новости медицины и фармации». Медицина сегодня. — 2011. — № 11-12. — С. 371-372.

7. Булатов В.П. Роль системной эндотоксинемии, антиэндотоксинового и антибактериального иммунитета в развитии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей / В.П. Булатов, А.А. Камалова, О.Д. Зинкевич, Н.А. Сафина // Педиатрия. — 2011. — Т. 90, № 2. — С. 19-23.

8. Best W.R., Becktel J.M., Singleton J.W. Rederived values of the eight coefficients of the Crohn’s disease activity index (CDAI) // Gastroenterology. — 1979. — Vol. 77. — Р. 843-6.

9. Lewis J.D., Chuai Sh., Nessel L. et al. Use of the Non-invasive Components of the Mayo Score to Assess Clinical Response in Ulcerative Colitis // Inflamm Bowel Dis. — 2008 December. — Vol. 14, № 12. — Р. 1660-1666.

10. Brandtzaeg P., Carlsen H.S., Halstensen T.S. The B-cell system in inflammatory bowel disease // Advances in Experimental Medicine and Biology. — 2006. — Vol. 579. — P. 149-167.

11. Maeda S., Ohno K., Uchida K., Nakashima K. et al. Decreased immunoglobulin A concentrations in feces, duodenum, and peripheral blood mononuclear cells of dogs with inflammatory bowel disease // Journal of Veterinary Internal Medicine. — 2013 January/February. — Vol. 27, Issue 1. — P. 47-55.

12. Аниховская И.А. Выявление групп риска, выбор тактики обследования и оценка эффективности лечения различных заболеваний по показателям антиэндотоксинового иммунитета: автореф. дис. … канд. мед. наук. — М., 2001. — 18 с.

13. Champion K., Chiu L., Ferbas J., Pepe M. Endotoxin neutralization as a biomonitor for inflammatory bowel disease // PLoS One. — 2013 Jun 24. — Vol. 8, № 6. — e67736.

14. Хамитов Р.Ф., Латфуллин И.А., Богоявленская О.В и др. Основы лабораторной диагностики. Учебно-методическое пособие для системы послевузовского профессионального образования. — Казань, 2009. — С. 67.

15. Philippe D., Heupel E., Blum-Sperisen S. et al. Treatment with Bifidobacterium bifidum 17 partially protects mice from Th1-driven inflammation in a chemically induced model of colitis // International Journal of Food Microbiology. — Vol. 149, Issue 1. — 2011 September 1. — P. 45-49.

REFERENCES

1. Tkachev A.V., Mkrtchyan L.S., Nikitina K.E. et al. Inflammatory bowel disease: at the crossroads of problems. Prakticheskaya meditsina. Gastroenterologiya, 2012, no. 3 (12) (in Russ.).

2. Sa’ad Y. Salim, Johan D. Söderholm. Importance of disrupted intestinal barrier in inflammatory bowel diseases. Inflammatory Bowel Diseases, 2011, January, vol. 17, issue 1, pp. 362-381.

3. Abraham C., Medzhitov R. Interactions Between the Host Innate Immune System and Microbes in Inflammatory Bowel Disease. Gastroenterology, 2011, May, vol. 140, issue 6, pp. 1729-1737.

4. Wehkamp J., Antoni L., Ostaff M., Stange E.F. The Intestinal Barrier in Implications for Future Therapeutic Intervention. Falk Foundation e.V, 2013, pp. 36-37.

5. Porras M., Martín M.T., Yang P.C. et al. Correlation between cyclical epithelial barrier dysfunction and bacterial translocation in the relapses of intestinal inflammation. Inflamm Bowel Dis, 2006, September, vol. 12, no. 9, pp. 843-52.

6. Osadchaya O.I., Boyarskaya A.M. Enterosorption influence on the development of humoral immunity reactions in patients with ulcerative colitis. Gazeta “Novosti meditsiny i farmatsii”. Meditsina segodnya, 2011, no, 11-12, pp. 371-372 (in Russ.).

7. Bulatov V.P., Kamalova A.A., Zinkevich O.D., Safina N.A. Role of systemic endotoxemia, antiendotoxin and antibacterial immunity in the development of duodenal ulcer in children. Pediatriya, 2011, vol. 90, no. 2, pp. 19-23 (in Russ.).

8. Best W.R., Becktel J.M., Singleton J.W. Rederived values of the eight coefficients of the Crohn’s disease activity index (CDAI). Gastroenterology, 1979, vol. 77, pp. 843-846.

9. Lewis J.D., Chuai Sh., Nessel L. et al. Use of the Non-invasive Components of the Mayo Score to Assess Clinical Response in Ulcerative Colitis. Inflamm Bowel Dis, 2008, December, vol. 14, no. 12m pp. 1660-1666.

10. Brandtzaeg P., Carlsen H.S., Halstensen T.S. The B-cell system in inflammatory bowel disease. Advances in Experimental Medicine and Biology, 2006, vol. 579, pp. 149-167.

11. Maeda S., Ohno K., Uchida K., Nakashima K. et al. Decreased immunoglobulin A concentrations in feces, duodenum, and peripheral blood mononuclear cells of dogs with inflammatory bowel disease. Journal of Veterinary Internal Medicine, 2013 January/February, vol. 27, issue 1, pp. 47-55.

12. Anikhovskaya I.A. Vyyavlenie grupp riska, vybor taktiki obsledovaniya i otsenka effektivnosti lecheniya razlichnykh zabolevaniy po pokazatelyam antiendotoksinovogo immuniteta: avtoref. dis. … kand. med. nauk [Identification of risk groups, the choice of tactics examination and evaluation of the effectiveness of treatment of various diseases in terms antiendotoxin immunity. Synopsis of the dis. of the PhD med. sci]. Moscow, 2001. 18 p.

13. Champion K., Chiu L., Ferbas J., Pepe M. Endotoxin neutralization as a biomonitor for inflammatory bowel disease. PLoS One, 2013, June 24, vol. 8, no. 6, e67736.

14. Khamitov R.F., Latfullin I.A., Bogoyavlenskaya O.V. et al. Osnovy laboratornoy diagnostiki. Uchebno-metodicheskoe posobie dlya sistemy poslevuzovskogo professional’nogo obrazovaniya [Basics of laboratory diagnostics. Teaching aid for postgraduate education system]. Kazan, 2009. P. 67.

15. Philippe D., Heupel E., Blum-Sperisen S. et al. Treatment with Bifidobacterium bifidum 17 partially protects mice from Th1-driven inflammation in a chemically induced model of colitis. International Journal of Food Microbiology, vol. 149, issue 1, 2011, September 1, pp. 45-49.